Valeria Levi - Jueves 15 de Octubre 11:00 hs

Explorando la dinámica de procesos complejos con técnicas avanzadas de microscopía de fluorescencia

Nuestra visión de la organización y funcionamiento de sistemas tan complejos como las células ha cambiado bastante con el tiempo, en parte gracias al desarrollo de nuevas técnicas de microscopía óptica que nos permiten observar la evolución de procesos, tanto en el espacio como en el tiempo.

Las técnicas de localización y seguimiento de partículas únicas permiten recuperar la posición de una molécula/partícula con precisión de unos pocos nanómetros en función del tiempo; el análisis cuantitativo de las trayectorias de estas partículas permite caracterizar la dinámica de las mismas. Dado que el estudio es a nivel de molécula/partícula única, la información que obtenemos en estos experimentos es distinta a la que se obtiene al promediar el comportamiento de muchas partículas revelando nuevos aspectos del proceso estudiado. En este contexto, describiré la utilización de estas técnicas en estudios de transporte intracelular conducido por motores moleculares.

Por otra parte, discutiré los fundamentos de los métodos basados en el análisis de fluctuaciones de fluorescencia. Dichos métodos consisten en el análisis de las fluctuaciones en la intensidad de fluorescencia producidas por moléculas fluorescentes que atraviesan el pequeño volumen de observación obtenido en microscopios confocales o de excitación por 2 fotones. A partir del análisis cuantitativo de estas fluctuaciones se obtiene información de la movilidad de las moléculas y su interacción con otras especies. A modo de ejemplo, presentaré la aplicación de estas técnicas al estudio de los mecanismos de acción de distintos factores de transcripción involucrados en el desarrollo de embriones de ratón. Nuestro estudio permitió explorar la interacción de dichos factores con la cromatina a nivel de célula individual en embriones vivos y seguir esta dinámica durante el desarrollo de embriones tempranos.